如何选择合适的3D培养技术的冷冻保护剂?

　3D培养技术的过程当中，需要冷冻保护剂来适当的对细胞进行冷冻处理，这样也能够减少细胞的危害，以及使细胞的保存时间更长。但是3D培养技术中，如何才能够选择合适的冷冻保护剂呢？

　　如何选择合适的3D培养技术的冷冻保护剂?

　　冷冻保护剂是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物质。冷冻保护剂常常配制成一定的溶液。一般来讲，只有红细胞、大多数微生物和极少数有核的哺乳动物细胞悬浮在不加冷冻保护剂的水或简单的盐溶液中，并以最适的冷冻速率冷冻，可以获得活的冻存物。

　　但对于大多数有核哺乳动物细胞来说，在不加冷冻保护剂的情况下，无最适冷冻速率可言，也不能获得活的冷冻物。例如将小鼠骨髓细胞悬浮在不加冷冻保护剂的平衡盐溶液中，并以0.3——600℃/min 的冷冻速率降温冷冻，98% 以上的细胞会死亡;而加入甘油冷冻保护剂进行冷冻保存时，98% 以上的细胞都可存活。

　　冷冻保护剂可分为渗透性和非渗透性两类。

　　01class渗透性冷冻保护剂

　　渗透性冷冻保护剂可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。其保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前，渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤，同时，细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。

　　甘油和DMSO并不防止细胞内结冰，在使用该类冷冻保护剂时，需要一定的时间进行预冷，让甘油或DMSO等成分渗透到细胞内，在细胞内外达到平衡以起到充分的保护作用。

　　目前DMSO的应用比甘油更为广泛，但要注意的是，DMSO在常温下对细胞的毒性作用较大，而在4℃时，其毒性作用大大减弱，且仍能以较快的速度渗透到细胞内。所以，冻存时DMSO平衡多在4℃下进行，一般需要40——60分钟。

　　02class非渗透性冷冻保护剂

　　非渗透性冷冻保护剂不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉等。其保护机制的假说很多，其中有一种可能是，聚乙烯吡咯烷酮等大分子物质可以优先同溶液中水分子结合，降低溶液中自由水的含量，使冰点降低，减少冰晶的形成;同时，由于其分子量大，使溶液中电解质浓度降低，从而减轻溶质损伤。

　　选择好了3d冷冻细胞保护剂之后，我们一定要使用正确的方式去开启，而且使用的量不能够太多，也不能太少，否则都会造成3D培养技术保存失败。具体的使用方式，可以去康宁平台上看一看，而且在购买之后也会有说明书。